1、动物源细菌抗菌药物敏感性测试技术规程纸片扩散法22中华人民共和国农业行业标准备案号：XXXX-XXXX67.120.10CCS X41442022Technical code of practice of antimicrobial susceptibility tests for bacteria isolatedfrom animalsDisk diffusion method中华人民共和国农业农村部发 布2022?07?11发布2022?10?01实施41442022NY?/T414420222?前?言本文件按照?标准化工作导则?第?部分?标准化文件的结构和起草规则?的规定起草?请注意本
2、文件的某些内容可能涉及专利?本文件的发布机构不承担识别专利的责任?本文件由农业农村部畜牧兽医局提出?本文件由全国兽药残留与耐药性控制专家委员会归口?本文件起草单位?中国动物卫生与流行病学中心?中国兽医药品监察所?本文件主要起草人?王娟?赵琪?曲志娜?张纯萍?刘俊辉?黄秀梅?宋立?李月华?刘娜?张青青?张喜悦?高玉斌?崔明全?王君玮?王鹤佳?徐士新?动物源细菌抗菌药物敏感性测试技术规程纸片扩散法?范围本文件规定了动物源细菌对抗菌药物敏感性测试纸片扩散法的操作步骤?结果判读?质量控制?记录及生物安全措施等技术要求?本文件适用于采用纸片扩散法测定抗菌药物对动物源细菌的抑菌圈大小?规范性引用文件下列文
3、件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款?其中?注日期的引用文件?仅该日期对应的版本适用于本文件?不注日期的引用文件?其最新版本?包括所有的修改单?适用于本文件?分析实验室用水规格和实验方法?实验室?生物安全通用要求?术语和定义下列术语和定义适用于本文件?菌落形成单位?在琼脂平板上经过一定温度和时间培养后形成的每一个菌落?试剂或材料?要求除另有规定外?所有试剂均为分析纯?水为符合?规定的三级水?培养基按附录?配制或用商品化产品?培养基制备?阳离子调节?肉汤?按照附录?中?的规定执行?营养琼脂?按照?的规定执行?琼脂?按照?的规定执行?质控菌株?大肠埃希菌?用作肠杆菌科?巴氏杆菌
4、?放线杆菌的质控菌?粪肠球菌?用作肠球菌属的质控菌?金黄色葡萄球菌?用作葡萄球菌属?产气荚膜梭菌的质控菌?肺炎克雷伯菌?用作克雷伯菌药敏试验的质控菌?肺炎链球菌?用作链球菌?巴氏杆菌的质控菌?材料?抗菌药物纸片?麦氏单位?标准比浊液?仪器设备?恒温培养箱?培养箱?二级生物安全柜?分析天平?感量?和?比浊仪?精确度?冰箱?药敏纸片分配器?游标卡尺?精度?抑菌圈读取仪?操作步骤?菌悬液的制备?两种方法任选其一?直接菌悬液法?取质控菌?测试菌单菌落?分别置于无菌生理盐水或无菌?中?用比浊仪或?麦氏单位标准比浊液调菌液浓度至?麦氏单位?相当于?生长法?取质控菌?测试菌单菌落?分别置于加有?无菌?的试管
5、中?培养?取菌液?用无菌生理盐水或无菌?调菌液浓度至?麦氏单位?相当于?适用于菌落不易直接乳化而不能获得浓度均一菌悬液的细菌?注?工作菌悬液应在配置后?内完成接种?接种用无菌棉拭子蘸取菌悬液?在管内壁挤压?去除多余液体?从上至下?从左至右依次涂?琼脂平板?苛养菌培养基见附录?表面?重复操作两次?每次旋转平皿约?最后涂抹琼脂的边缘一圈?确保菌液分布全面?均匀?室温放置?待水分完全吸收?纸片放置取抗菌药物纸片?恢复至室温?用无菌镊子或药敏纸片分配器将抗菌药物纸片放置于接种菌液的琼脂表面?轻压使与琼脂表面完全接触?各纸片中心相距应大于?纸片距离平板内缘应大于?放置?培养置于?培养?苛养菌培养条件见附
6、录?注?在培养过程中平板应单独摆放?叠放平板个数不超过?个?结果判读取出平板?在黑色?不反光的背景下?用游标卡尺测量抑菌圈直径?抑菌圈边缘以肉眼见不到细菌明显生长为限?或直接用抑菌圈读取仪读取抑菌圈直径?质控菌株的抑菌圈直径应在质控范围内?见附录?中的表?否则?试验结果无效?质量控制?质控菌株质控菌株可从?或参考实验室以及商业机构获得?保存其来源和传代等记录?并有证据表明质控菌株性能满足要求?传代不宜超过?次?质控频率?日质控日质控?重复方案?应对质控菌株每天重复测定?次?每次单独制备接种物?连续测定?记录药物的抑菌圈直径?并与质控菌株要求范围进行比较?见表?根据检测结果是否在控?决定是否转周质?控?日质控?重复方案?中可接受标准和推荐措施见表?表?日质控?重复方案?中可接受标准和推荐措施初始实验超出范围次数?基于?个重复?初始实验结论?基于?个重复?重复实验后超出范围次数?基于?个重复?重复实验后结论?方案成功?执行周质控?再进行另一个?重复?方案?方案成功?执行周质控?方案失败?调查并采取适当纠正措施?继续日质控?方案失败?调查采取适当纠正措施?继续日质控?周质控实验室在日质控情况
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