1、犐 犆犛 犆犆犛犅?犌犅犜?犌犅犜?犇犲 狋 犲 狉犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳犫 犻 狅 犵 犲 狀 犻 犮犪犿 犻 狀 犲 狊犻 狀犪 狀 犻 犿犪 犾 犱 犲 狉 犻 狏 犲 犱犳 犲 犲 犱 狊犎 犻 犵 犺狆 犲 狉 犳 狅 狉犿犪 狀 犮 犲犾 犻 狇 狌 犻 犱犮 犺 狉 狅犿犪 狋 狅 犵 狉 犪 狆 犺 狔?前言本文件按照 标准化工作导则第部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。本文件代替 动物源性饲料中生物胺的测定高效液相色谱法，与 相比，除结构调整和编辑性改动外，主要技术变化如下：增加了色胺、苯乙胺和章鱼胺的测定；增加了虾粉、鸡肉粉、猪肉粉、血粉、羽毛粉、鱼溶
2、浆、乌贼膏和蚕蛹粉种动物源性饲料原料；修改了方法的检出限，增加了定量限（见第章，年版的第章）；修改了衍生剂、衍生条件和衍生后处理方法（见 、，年版的、）；修改了色谱梯度洗脱程序（见表，年版的表）；删除了“种生物胺的化学名称、分子式和相对分子质量”（见 年版的附录）；修改了生物胺液相色谱图（见附录，年版的附录）。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由全国饲料工业标准化技术委员会（）提出并归口。本文件起草单位：中国农业大学。本文件主要起草人：杨文军、田颖、张丽英、陈义强。本文件于 年首次发布，本次为第一次修订。犌犅犜 动物源性饲料中生物胺的测定高效液相色
3、谱法范围本文件规定了动物源性饲料原料中色胺、苯乙胺、腐胺、尸胺、组胺、章鱼胺、酪胺、亚精胺和精胺的高效液相色谱测定方法。本文件适用于鱼粉、虾粉、鸡肉粉、猪肉粉、肉骨粉、血粉、羽毛粉、鱼溶浆、乌贼膏和蚕蛹粉等动物源性饲料原料中色胺、苯乙胺、腐胺、尸胺、组胺、章鱼胺、酪胺、亚精胺和精胺九种生物胺的测定。本文件检出限为，定量限为 。规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。分析实验室用水规格和试验方法 动物饲料试样的制备术语和定义本文件没有需要界
4、定的术语和定义。原理试样中的生物胺经高氯酸溶液提取、丹磺酰氯衍生，用高效液相色谱仪测定，外标法定量。试剂或材料除非另有规定，仅使用分析纯试剂。水：，一级。乙腈：色谱纯。丙酮。氨水。乙酸铵：色谱纯。乙酸铵溶液（）：称取 乙酸铵（），加水溶解，定容至。高氯酸提取液（）：准确量取高氯酸 ，用水定容至。氢氧化钠溶液（）：准确称取氢氧化钠，用水定容至 。饱和碳酸氢钠溶液：向水中加入足量的碳酸氢钠固体直到无法再溶解。盐酸溶液（）：准确量取 浓盐酸，用水定容至。犌犅犜 提供下载 丹磺酰氯衍生溶液（）：称取丹磺酰氯（号：，），用丙酮溶解，定容至 。临用现配。标准储备溶液（）：分别称取色胺（号：，纯度）、苯乙胺
5、（号：，纯度）、腐胺二盐酸（号：，纯度）、尸胺（号：，纯度 ）、组胺（号：，纯度）、章鱼胺一盐酸（号：，纯度 ）、酪胺（号：，纯度）、亚精胺三盐酸（号：，纯度 ）、精胺（号：，纯度）（精确至 ），分别置于 棕色容量瓶中，用盐酸溶液（）溶解并定容。于 以下保存，有效期为个月。注：标准溶液的配制浓度以各生物胺的单体计算，称取标准品时对其中的盐酸盐进行折算。所有标准溶液配制好后转移至密闭棕色容器中，避光贮存。混合标准中间溶液（）：准确移取各生物胺标准储备溶液（）于 棕色容量瓶中，用盐酸溶液（）定容。于保存，有效期为周。混合标准系列溶液：准确移取适量混合标准中间溶液（）于 棕色容量瓶中，用水（）稀释定
6、容配成系列标准溶液，浓度分别为：、。临用现配。微孔滤膜：，有机系。仪器设备 高效液相色谱仪：配有紫外检测器或二极管阵列检测器。分析天平：感量 和 。恒温摇床：控温精度。旋涡混匀器。离心机：转速不低于 。氮吹仪。超声波清洗器。匀浆机。样品 固体按 制备样品，至少 ，粉碎使其全部通过 孔径的分析筛，充分混匀，装入磨口瓶中，避光保存，备用。膏浆状按 制备样品，至少 ，用一台机械搅拌器或均质器混合样品，边摇边用勺或大口吸管转移 或 样品到磨口瓶中，避光保存，备用。试验步骤 提取平行做两份试验。称取试样，准确至 ，置于 离心管中，准确加入 高氯酸提犌犅犜 提供下载取液（），涡旋混匀（膏浆状样品均质），置于摇床上，室温下 振荡 ，于 离心 ，上清液倒入另一 离心管中，残渣再用 高氯酸提取液（）提取，重复上述操作，合并上清液，备用。衍生化准确移取上清液（见），放入 具塞离心管中，依次加入 氢氧化钠溶液（）、饱和碳酸氢钠溶液（）和丹磺酰氯衍生溶液（），涡旋混匀，置摇床上，避光反应 。加入 氨水（）终止反应，混匀，静置 ，氮气吹去丙酮，用乙腈（）定容至，超声复溶，混匀，用 有机微孔滤膜（）过滤备用。精确
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