1、2023?04?11发布2023?08?01实施饲料添加剂-半乳糖苷酶活力的测定分光光度法46中华人民共和国农业行业标准备案号：XXXX-XXXX65.120CCS B43612023Feed additivesDetermination of-galactosidase activitySpectrophotometric method中华人民共和国农业农村部发 布N Y/T 前言本文件按照G B/T 标准化工作导则第部分:标准化文件的结构和起草规则 的规定起草.请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别专利的责任.本文件由农业农村部畜牧兽医局提出.本文件由全国饲料工业标
2、准化技术委员会(S A C/T C)归口.本文件起草单位:武汉新华扬生物股份有限公司、全国畜牧总站.本文件主要起草人:詹志春、粟胜兰、徐丽、周樱、苏丹、陈雪姣、邓晓旭、程瑛.N Y/T 饲料添加剂 半乳糖苷酶活力的测定分光光度法范围本文件描述了饲料添加剂 半乳糖苷酶活力的分光光度测定方法.本文件适用于饲料添加剂 半乳糖苷酶及其混合型饲料添加剂酶制剂中 半乳糖苷酶活力的测定.本文件的定量限为 U/g(或U/m L).规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单
3、)适用于本文件.G B/T 分析实验室用水规格和试验方法G B/T 动物饲料试样的制备术语和定义下列术语和定义适用于本文件.半乳糖苷酶活力单位 g a l a c t o s i d a s ea c t i v i t yu n i t在、p H 的条件下,每分钟从浓度为mm o l/L的对硝基苯基 D 吡喃半乳糖苷溶液中释放m o l对硝基苯酚所需要的酶量.注:酶活力单位为U.原理在一定温度和p H条件下,半乳糖苷酶分解对硝基苯基 D 吡喃半乳糖苷为 D 吡喃半乳糖和对硝基苯酚.对硝基苯酚在碳酸钠溶液中呈黄色,反应液的吸光值与酶解产生的对硝基苯酚的量成正比,采用分光光度法测定反应液吸光值,
4、计算 半乳糖苷酶活力.试剂或材料除非另有说明,仅使用分析纯试剂.水:G B/T ,三级.碳酸钠溶液(m o l/L):称取 g无水碳酸钠,加水溶解,定容至 m L.乙酸溶液(m o l/L):吸取冰乙酸 m L,加水定容至 m L,摇匀.乙酸钠溶液(m o l/L):称取无水乙酸钠 g,加水溶解,定容至 m L.乙酸乙酸钠缓冲液(m o l/L):称取无水乙酸钠 g,加水约 m L溶解,用乙酸溶液()或乙酸钠溶液()调节p H至 ,定容至 m L.对硝基苯基 D 吡喃半乳糖苷溶液(mm o l/L):称取对硝基苯基 D 吡喃半乳糖苷(化学式C H NO,相对分子质量 ,纯度,S i g m a
5、N 或上海扶生M )g,用 m L乙酸乙酸钠缓冲液()溶解,定容至 m L.避光保存,有效期个月.)S i g m aN 和上海扶生M 是商品名,给出这一信息是为了给本文件的使用者一个相对标准,并不表示对该产品的认可.如果其他产品能有相同的效果,则可使用这些等效的产品.对硝基苯酚标准储备溶液(m o l/m L):准确称取对硝基苯酚 g,加入 m L碳酸钠溶液N Y/T (),溶解,定容至 m L,临用现配.对硝基苯酚标准溶液(m o l/m L):吸取对硝基苯酚标准储备溶液()m L,用碳酸钠溶液()稀释定容至 m L,临用现配.仪器设备 紫外可见分光光度计:波长准确度为n m,可在 n m
6、处比色.分析天平:精度为 g.p H计:精确至 .涡旋混合器.恒温振荡器:精度为 .恒温水浴锅:精度为 .秒表.恒温磁力搅拌器.离心机:转速在 r/m i n以上.样品按照G B/T 的规定制备样品,至少 g(或 m L),固态样品应全部通过 mm孔径的分析筛.充分混匀,装入磨口瓶中,密闭保存,备用.试验步骤 标准曲线绘制取 m L试管按表加入相关溶液(每个浓度个平行),混合,静止显色m i n,以号试管试液作为标准空白溶液,在 n m波长下测定其他试管的吸光度.以对硝基苯酚的量为Y轴、吸光度为X轴,绘制标准曲线,R达到 以上.表标准曲线的制作试管号对硝基苯酚标准溶液,L 乙酸乙酸钠缓冲液,L 碳酸钠溶液,m L对硝基苯酚的量,m o l 试样溶液的制备 固态试样溶液的制备平行做份试验.称取 g g试样,精确至 g,置于锥形瓶中,准确加入 m L乙酸乙酸钠缓冲液().置于()恒温振荡器或恒温磁力搅拌器中提取,不低于 r/m i n振荡或搅拌 m i n,静置 m i n,离心或过滤,取上清液或滤液,用乙酸乙酸钠缓冲液()进行稀释,稀释后待测酶液中 半乳糖苷酶活力控制在 U/m L U/
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