1、2023?04?11发布2023?08?01实施禽蛋中卵磷脂的测定高效液相色谱法04中华人民共和国农业行业标准备案号：XXXX-XXXX65.020.01CCS B43542023Determination of phosphatidylcholine in eggs by high performanceliquid chromatography中华人民共和国农业农村部发 布N Y/T 前言本文件按照G B/T 标准化工作导则第部分:标准化文件的结构和起草规则 的规定起草.请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文的发布机构不承担识别专利的责任.本文件由农业农村部农产品质量安全监管司提出.本文
2、件由农业农村部农产品营养标准专家委员会归口.本文件起草单位:江苏省家禽科学研究所、农业农村部家禽品质监督检验测试中心(扬州)、谱尼测试集团江苏有限公司.本文件主要起草人:葛庆联、唐修君、马丽娜、高玉时、刘茵茵、陆俊贤、樊艳凤、贾晓旭、陈大伟、张静、周倩、施祖灏、唐梦君、张小燕、黄胜海、马尹鹏.N Y/T 禽蛋中卵磷脂的测定高效液相色谱法范围本文件规定了禽蛋中卵磷脂L 磷脂酰胆碱(P C)的高效液相色谱测定方法.本文件适用于鸡蛋、鸭蛋、鹅蛋、鸽蛋、鹌鹑蛋等禽蛋.规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不
3、注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件.G B/T 分析实验室用水规格和试验方法术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义.原理试样经正相色谱柱分离,蒸发光散射检测器检测,保留时间定性,外标法定量.试剂和材料 试剂除非另有规定,仅使用分析纯试剂.水:G B/T ,一级.乙醚(CH O).无水乙醇(CHO).三氯甲烷(CHC l):色谱纯.甲醇(CHO):色谱纯.正己烷(CH):色谱纯.异丙醇(CHO):色谱纯.乙酸(CHO):色谱纯.三乙胺(CH N):色谱纯.溶液配制 三氯甲烷甲醇溶液():分别量取 m L三氯甲烷()和 m L甲醇()置于同一棕色试剂瓶中,混匀.乙醚无水
4、乙醇溶液():分别量取 m L乙醚()和 m L无水乙醇()置于同一棕色试剂瓶中,混匀.标准品L 磷脂酰胆碱(C H NOP,C A S号:):含量,或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质.标准溶液的制备 L 磷脂酰胆碱标准储备液:称取 m g(精确至 m g)L 磷脂酰胆碱置于 m L棕色容量N Y/T 瓶中,用三氯甲烷甲醇溶液()溶解并定容至刻度,配制成浓度为 m g/m L的L 磷脂酰胆碱标准储备液,以下冷冻保存,有效期个月.L 磷脂酰胆碱标准工作溶液:量取标准储备液()L、L、L、L和 L,用三氯甲烷甲醇溶液()稀释至m L,配制成 m g/m L、m g/m L、m g/m L、m
5、 g/m L、m g/m L系列标准工作溶液.仪器和设备 高效液相色谱仪:配有蒸发光散射检测器.天平:感量为m g和 m g.匀浆机:转速 r/m i n r/m i n.涡旋混匀器:转速 r/m i n.离心机:转速 r/m i n.氮吹仪.滤膜:孔径 m.试样的制备与保存 试样的制备 取枚 枚供试禽蛋,去壳,并使均质,总质量不少于 g,作为全蛋试样.取枚 枚供试禽蛋,去壳和蛋清,用滤纸吸干蛋黄表面的蛋清,并使均质,总质量不少于 g,作为蛋黄试样.试样的保存 以下保存.测定步骤 提取称取 g全蛋试样()或 g蛋黄试样()(精确到 g),于 m L离心管中,加入 m L乙醚无水乙醇溶液(),涡
6、旋振荡m i n,r/m i n离心m i n,上清液转入另一 m L离心管中,重复提取次,合并次上清液,氮气吹干,用三氯甲烷甲醇溶液()溶解并定容至 m L,过 m滤膜,供高效液相色谱测定.液相色谱参考条件 色谱柱:S i O(mm mm,m),或相当者.流动相:A为甲醇()水乙酸()三乙胺(),B为正己烷()异丙醇()流动相A .流速:m L/m i n.进样量:L.柱温:.蒸发光散射检测器参数:漂移管温度为,载气流量为 L/m i n.流动相梯度洗脱程序见表.表梯度洗脱程序时间,m i nA,B,N Y/T 表(续)时间,m i nA,B,标准曲线的制作分别取系列标准工作溶液()上机测定,以L 磷脂酰胆碱标准工作溶液浓度的对数为横坐标,对应的峰面积的对数为纵坐标,绘制标准工作曲线.L 磷脂酰胆碱标准溶液的高效液相色谱图见附录A.测定取试样溶液上机测定,并作多点校准.以保留时间定性,色谱峰面积定量,按外标法计算.结果计算试样中L 磷脂酰胆碱含量以质量分数X计,按公式()计算.XVm ()式中:X 试样中L 磷脂酰胆碱含量的数值,单位为克每百克(g/g);由标准工作曲线得到试样溶液中
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