1、2023?04?11发布2023?08?01实施蔬菜中甲基硒代半胱氨酸、硒代蛋氨酸和硒代半胱氨酸的测定液相色谱-串联质谱法31中华人民共和国农业行业标准备案号：XXXX-XXXX67.080.20CCS B43532023Determination of methylselenocysteine,selenotmethionine and selenocysteinein vegetables by liquid chromatography-tandem mass spectrometry中华人民共和国农业农村部发 布N Y/T 前言本文件按照G B/T 标准化工作导则第部分:标准化文件的结
2、构和起草规则 的规定起草.请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别专利的责任.本文件由农业农村部农产品质量安全监管司提出.本文件由农业农村部农产品营养标准专家委员会归口.本文件起草单位:江西省农业科学院农产品质量安全与标准研究所、江西省农学会、江西省农业科学院土壤肥料与资源环境研究所.本文件主要起草人:廖且根、张莉、向建军、万鹏、袁丽娟、沈思言、张大文、魏益华、罗林广、戴廷灿、邱素艳、熊艳.N Y/T 蔬菜中甲基硒代半胱氨酸、硒代蛋氨酸和硒代半胱氨酸的测定液相色谱串联质谱法范围本文件规定了蔬菜中甲基硒代半胱氨酸、硒代蛋氨酸和硒代半胱氨酸含量的液相色谱串联质谱测定方法.本文
3、件适用于蔬菜中甲基硒代半胱氨酸、硒代蛋氨酸和硒代半胱氨酸含量的测定.规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件.G B/T 分析实验室用水规格和试验方法术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义.原理试样中硒代氨基酸用蛋白酶水解提取,经超滤管离心净化,用液相色谱串联质谱仪检测,基质匹配标准溶液校准,外标法定量.试剂和材料 除另有规定外,所有试剂均为分析纯,水为符合G B/T 规定的一级水.试剂 甲醇(CHOH):色谱纯.甲酸(HC OOH):色
4、谱纯.蛋白酶(p r o t e a s eX I V,C A S号:):酶活力 U/m g.抗坏血酸(CHO,C A S号:).三羟甲基氨基甲烷(CH NO,C A S号:).盐酸(HC l),浓度为 .试剂配制 蛋白酶溶液(m g/m L):称取蛋白酶()m g,用水稀释定容至 m L,摇匀,备用,现用现配.抗坏血酸溶液(m o l/L):称取抗坏血酸()g,用水稀释定容至 m L,摇匀,备用,现用现配.三羟甲基氨基甲烷盐酸(T r i s HC l)缓冲溶液(mm o l/L,p H ):称取 g三羟甲基氨基甲烷()溶于 m L水中,用盐酸()调节到p H ,加水稀释至 m L,摇匀,备
5、用.甲酸溶液():量取甲酸()m L,用水稀释定容至 m L,摇匀,备用.标准品 甲基硒代半胱氨酸(CHNOS e,C A S号:):纯度,或经国家认证并授予标准物N Y/T 质证书的标准物质.硒代蛋氨酸(CH NOS e,C A S号:):纯度,或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质.硒代半胱氨酸(CHNOS e,C A S号:):纯度,或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质.标准溶液配制 甲基硒代半胱氨酸标准储备溶液(m g/L,按S e计):取甲基硒代半胱氨酸()标准品 m g(精确至 m g),置于 m L容量瓶中,用水溶解并定容.于冷藏保存,有效期为个月.硒代蛋氨酸标准储备溶液(
6、m g/L,按S e计):取硒代蛋氨酸()标准品 m g(精确至 m g),置于 m L容量瓶中,用水溶解并定容.于冷藏保存,有效期为个月.硒代半胱氨酸标准储备溶液(m g/L,按S e计):取硒代半胱氨酸标准品()m g(精确至 m g),置于 m L容量瓶中,用 m L甲酸()溶解后,用水溶解并定容.于冷藏保存,有效期为个月.混合标准工作溶液(m g/L,按S e计):分别量取 m L标准储备溶液(,)于 m L容量瓶中,用水稀释并定容至 m L,现用现配.材料 微孔滤膜:水相,m.超滤离心管:m L/k u,或性能相当者.仪器设备 液相色谱串联质谱仪:配有电喷雾离子源(E S I).分析天平:感量 g和 g.p H计,精度 .涡旋混合仪.恒温水浴振荡器.高速离心机,转速不低于 r/m i n.组织捣碎机.试验步骤 试样的制备将蔬菜样品可食部分经组织捣碎均分成份,装入洁净容器内,作为试样密封并标明标记.试样提取与净化称取试样g(精确至 g),置于 m L离心管中,依次加入蛋白酶溶液()m L、抗坏血酸溶液()m L和T r i s HC L缓冲溶液()m L,涡旋混匀,于恒温水浴振
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