动物源伪结核棒状杆菌分离与鉴定技术规程NYT4657-2025.pdf

1、动物源伪结核棒状杆菌分离与鉴定技术规程NYT4657-2025讲解了伪结核棒状杆菌（Corynebacterium pseudotuberculosis）从动物脓肿样品中规范开展分离、筛查与鉴定的全过程技术路径，明确了涵盖样品采集与低温运输、微生物形态学观察、触酶试验初筛、生化鉴定、PCR分子检测及基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）鉴定等多层级验证方法的操作参数和判定标准。该规程系统规定了所需试剂材料纯度等级、培养基配制方法（包括绵羊血琼脂、BHI肉汤及小牛血清BHI琼脂）、仪器设备配置要求（如二级生物安全柜、PCR仪、质谱仪、高速冷冻离心机等），细化了过氧化氢溶液、

2、基质溶液、灭菌甘油等关键试剂的制备流程，并对DNA提取、引物序列（SrRNA F/R）、PCR反应体系（25 L）、扩增程序（35个循环）、电泳分析（200 bp特异性条带判读）及质谱样本前处理步骤作出标准化描述。规程强调阳性对照（ATCC/CVCC标准菌株）与阴性对照（ddHO）同步设置，要求PCR产物须经测序比对且相似度不低于98.5%，质谱鉴定分值须达种水平可信阈值。同时，文件全面覆盖菌株纯化后保藏方式（甘油冻存、磁珠法、蔗糖脱脂乳冻干）、生物安全操作规范及废弃物处置要求，严格遵循GB 19489、NY/T兽医实验室生物安全通则等上位标准，确保检测结果的可重复性、准确性与生物风险可控性。

3、动物源伪结核棒状杆菌分离与鉴定技术规程NYT4657-2025适用于各级动物疫病预防控制机构、兽医实验室、动物源细菌耐药性监测网络实验室、科研院所及高校相关微生物学与兽医公共卫生研究团队，特别适用于从事绵羊、山羊、马、牛等易感动物伪结核病诊断、流行病学调查、耐药性监测及菌株资源库建设的技术人员。该规程亦可为动物保健品企业、第三方检测机构开展动物源致病菌检测质量控制提供技术依据，同时服务于农业农村部门组织实施的全国动物源细菌耐药性监测计划中脓肿类临床样品的病原确认环节。规程内容紧扣基层实验室实际条件，在保障检测灵敏度与特异性的前提下兼顾可操作性，对提升我国动物源棒状杆菌感染防控能力、支撑动物源性食品安全与公共卫生风险评估具有明确应用价值。