淡水生物DNA条形码构建技术规程TCSES 80-2023.pdf

1、 ICS 13.020.01 CCS Z01 团体标准 T/CSES 802023 淡水生物 DNA 条形码构建技术规程 Technical regulations for construction of DNA barcodes of freshwater organisms 发布稿 2023-01-04 发布 2023-01-04 实施 中国环境科学学会 发 布 T/CSES 802023 I 目次 前言.II 引言.III 1 范围.1 2 规范性引用文件.1 3 术语和定义.1 4 试剂.3 5 设备和材料.3 样品采集及前处理设备.3 实验室分析设备.3 分析软件.3 其他辅助设备和

2、材料.3 6 DNA 条形码构建方法.3 DNA 条形码构建流程.4 物种采集与鉴定.4 条形码扩增与测序.4 条形码评估.5 物种条形码.5 7 质量控制与质量保证.5 质量控制.5 质量保证.5 8 废弃物处理.6 附录 A（资料性）常用 DNA 条形码引物及 PCR 扩增条件.7 附录 B（规范性）遗传距离分析原理和方法.9 附录 C（资料性）DNA 条形码数据表格.12 T/CSES 802023 II 前言 本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件

3、由南京大学提出。本文件由中国环境科学学会归口。本文件起草单位：南京大学、江苏省环境监测中心、中国环境监测总站、浙江省生态环境监测中心、昆明学院、南京易基诺环保科技有限公司。本文件主要起草人：张丽娟、张效伟、张咏、杨江华、金小伟、俞洁、徐杉、赵峥、杨雅楠、贾世琪、田颖、王志浩、孙晶莹。T/CSES 802023 III 引言 DNA条形码技术是利用生物共有的、但种间差异明显的遗传信息脱氧核糖核酸（DNA）序列来实现物种鉴定的技术，具有可标准化和可量化的特点。构建淡水生物DNA条形码有助于记录我国淡水生物物种分子遗传学特征，实现物种的快速准确鉴定。为规范淡水生物DNA条形码构建，促进DNA条形码技

4、术在我国淡水生物鉴定、生物监测技术体系中的应用推广，制定本文件。T/CSES 802023 1 淡水生物 DNA 条形码构建技术规程 1 范围 本文件规定了淡水生物DNA条形码构建方法和质量控制与质量保证。本文件适用于我国淡水生态系统中浮游植物、着生藻类、水生维管束植物、浮游动物、大型底栖无脊椎动物和鱼类等生物类群的DNA条形码构建；其他生态系统生物DNA条形码构建可参照执行。2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB 19489

5、 实验室 生物安全通用要求 GB/T 30989 高通量基因测序技术规程 GB/T 34265 Sanger法测序技术指南 GB/T 35537 高通量基因测序结果评价要求 GB/T 37874 核酸提取纯化方法评价通则 HJ 710.7 生物多样性观测技术导则 内陆水域鱼类 HJ 710.8 生物多样性观测技术导则 淡水底栖大型无脊椎动物 HJ 710.12 生物多样性观测技术导则 水生维管植物 HJ 1216 水质 浮游植物的测定 0.1 ml计数框-显微镜计数法 LY/T 3191 林木DNA条形码构建技术规程 SC/T 9402 淡水浮游生物调查技术规范 SN/T 4278 国境口岸医

6、学媒介昆虫DNA条形码鉴定操作规程 SN/T 4279 国境口岸医学媒介昆虫DNA条形码鉴定实验室管理规范 SN/T 4835 实验室生物废弃物管理要求 DB 21/T 2777 海洋浮游微藻分离和筛选技术规程 DB 32/T 4178 河流水生态监测规范 3 术语和定义 GB/T 30989、GB/T 34265和SN/T 4278界定的以及下列术语和定义适用于本文件。引物 primer 在DNA复制过程中，结合于模板链上并作为复制延伸的起始位点和/或终止位点的，具有一定长度和顺序的寡核苷酸链。来源：GB/T 309892014，3.11 聚合酶链式反应 polymerase chain reaction；PCR 一种体外酶促合成特异DNA片段的方法，由高温变性、低温退火及适温延伸等几步反应组成一个周期，循环进行，使目的DNA得以迅速扩增，具有特异性强、灵敏度高、操作简便省时等特点。来源：LY/T 31912020，3.3 Sanger 测序 sanger sequencing 用于基因测序的双脱氧链末端终止法，在链延伸过程中利用荧光标记双脱氧碱基随机阻断，产生以A、T、C、G结束的