医用供体猪 基因鉴定通则DB51T3184-2024.pdf

1、 ICS 07.080 CCS A 40 DB51 四川省地方标准 DB51/T 31842024 医用供体猪 基因鉴定通则 四川省市场监督管理局 发 布 2024-07-19 发布 2024-08-08实施DB51/T 31842024 I 前言 本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由四川省经济和信息化厅提出、归口并解释。本文件起草单位：中国测试技术研究院生物研究所、成都中科奥格生物科技有限公司、四川省医学科学院四川省人民医院、四川泰康医院、南京医科大

2、学附属苏州医院、海南医学院第二附属医院、华中科技大学同济医学院附属同济医院、空军军医大学第一附属医院、成都达硕实验动物有限公司、成都爱迪眼科医院、四川省机械研究设计院（集团）有限公司、四川省实验动物学会医用猪专业委员会。本文件主要起草人：周李华、潘登科、马丽侠、邢向阳、陈璐、邓绍平、王佳梅、李巅远、张玉兰、王毅、杜嘉祥、陈刚、蒋子敬、窦科峰、杨恒钰、钟浩、姚晓明、庄瑛、莫玲。DB51/T 31842024 1 医用供体猪 基因鉴定通则 1 范围 本文件规定了医用供体猪基因鉴定的总体原则及鉴定方法。本文件适用于医用供体猪的生产、引种、交付过程中基因鉴定。基因修饰动物的基因鉴定可参考本文件。2 规

3、范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 30989 高通量基因测序技术规程 GB/T 33681.1 高通量基因测序样本预处理方法 第1部分：动物组织样本预处理 GB/T 35537 高通量基因测序结果评价要求 GB/T 38477 基因表达的测定 蛋白印迹法 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。3.1 医用供体猪 medical donor pigs 通过生物工程技术获得，用于提供医疗用途的活器官或生物材料制备的低免疫

4、原性猪及其群体。3.2 基因修饰 genetic modification 利用生物化学方法修改生物遗传物质，使生物产生新性状，修饰方式主要包括转基因、基因编辑介导的基因定点插入和基因敲除3种。注：医用供体猪常见基因修饰名称及种类见附录A。3.3 基因整合 gene integration 将特定基因片段导入宿主基因组内的基因修饰方法，包括转基因和基因定点插入。3.4 基因敲除 gene knock out 将特定基因片段从基因组中去除的基因修饰方式。3.5 遗传稳定性 genetic stability 通过连续检测不同代数基因修饰动物基因型、基因表达情况来评估基因修饰在动物群体中遗传稳定及

5、表达稳定的手段。3.6 基因组结构变异 genome structural variants DB51/T 31842024 2 在医用供体猪获得过程中，基因组上发生长片段（50 bp）的序列变化和位置关系变化。注：基因组结构变异包括长片段序列插入或删除、串联重复、染色体倒位、染色体内部或染色体之间的序列易位、基因拷贝数变异以及嵌合性变异等。3.7 脱靶 off-target 与靶标不同的基因组位置和/或核酸序列。示例：结合脱靶、切割脱靶、编辑脱靶、序列改变脱靶。注：编辑脱靶属于非预期编辑。来源：ISO 5058:1-2021，3.1.4 3.8 高通量测序 high-throughput s

6、equencing 以一次并行几十万到几百万条核酸分子序列测定和一般读长较短等为标志，适用于DNA的测序技术。来源：GB/T 35890-2018，3.1 4 总体原则 基因鉴定是医用供体猪制备过程中重要组成环节，医用供体猪制备、筛选、交付等过程应对其进行基因鉴定。因其用途的特殊性，医用供体猪基因鉴定应同时考虑安全性和有效性，降低因基因修饰技术引入的不可控因素。安全性和有效性评价应结合设计预期、基因修饰类型进行综合评估，鉴定项目可参考表1。表1 医用供体猪基因鉴定评价项目 序号 鉴定/检测项目 评价类型 1 基因型 有效性评价 2 基因表达 3 遗传稳定性 遗传稳定检测 4 基因组结构变异 安全性评价 5 脱靶 5 鉴定项目及方法 有效性评价 5.1 5.1.1 基因型鉴定 5.1.1.1 鉴定方法 样本DNA提取可选用符合要求的市售试剂盒进行提取，也可由实验室自配试剂进行提取。引物设计应在目标基因（拟整合基因/敲除基因靶位）上下游设计引物。样本DNA提取后，符合质量要求的DNA进行PCR扩增，产物经琼脂糖凝胶电泳，观察目标条带判定是否符合预期。判定基因整合见5.1.1.2 a）。判定