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青稞中燕麦镰刀菌LAMP检测技术规范DB54T0529-2025.pdf

1、青稞中燕麦镰刀菌LAMP检测技术规范讲解了针对青稞样品中燕麦镰刀菌的环介导等温扩增(LAMP)检测方法的完整技术流程与操作要求。该规范明确了检测的适用范围,即用于青稞中是否存在燕麦镰刀菌DNA的定性检测。文件系统阐述了方法原理,基于燕麦镰刀菌翻译延伸因子基因的特异性序列设计内外引物,在等温条件下利用Bst DNA聚合酶实现靶序列的高效扩增,并通过SYBR Green I染料进行显色判读。当扩增发生时,双链DNA大量生成,染料结合后荧光显著增强,溶液颜色由橙色转为绿色,实现肉眼直观判断结果。规范详细列出了所需试剂与材料的标准配置,包括引物序列、等温扩增混合液成分、DNA提取试剂及显色液的具体参数

2、。对仪器设备如可调移液器、水浴锅、PCR仪和计时器提出了基本要求。在测定步骤方面,规定了阴性、阳性及空白对照的设置原则、样品采集方式、DNA快速提取程序以及LAMP反应体系配制比例和反应条件(62恒温40分钟,随后80灭活10分钟)。强调在反应结束后通过加入显色液并在黑色背景下观察颜色变化来判定结果。同时明确了生物安全和防污染措施应遵循国家相关标准,确保检测过程的安全性和准确性。结果判定依据两个平行样本的颜色反应与对照组的一致性进行有效性确认,确保检测结果可靠。青稞中燕麦镰刀菌LAMP检测技术规范适用于从事农产品质量安全检测、植物病害分子诊断、粮食储运检疫及相关农业科研工作的技术人员和机构。该规范特别适用于西藏及其他高寒地区青稞种植区的镰刀菌污染监测工作,可用于农业监管部门、农产品检验检测中心、科研院所及高校实验室开展青稞真菌性病害快速筛查。由于其采用等温扩增技术,无需复杂热循环设备,适合基层单位和现场快速检测场景应用。此外,本规范也为食品安全控制、饲料原料质量评估以及农作物病原微生物防控提供了标准化技术支撑,是保障青稞产业健康发展和食品安全的重要技术依据。

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