1、汉滩病毒和汉城病毒双重实时荧光RT-PCR检测方法DB36T2206-2025讲解了针对汉滩病毒（HTNV）和汉城病毒（SEOV）的双重实时荧光逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测技术规范。该标准详细规定了检测所需的仪器设备、试剂材料、生物安全要求、操作流程及结果判读依据，适用于对啮齿类动物样本中两种病毒的同步快速筛查与鉴定。文件明确了检测靶标基因序列、引物与探针的具体序列信息，并提供了反应体系配置和扩增条件等关键参数，确保检测过程标准化与结果可比性。实验须在符合GB 19489要求的生物安全二级实验室中进行，所有样本处理均需在生物安全柜内完成，研磨后离心上清用于RNA提取，后续通过荧光定
2、量PCR仪进行检测。结果判定以阴性对照无扩增信号、阳性对照Ct值30且具典型扩增曲线为试验有效前提。样本检测中若双通道均出现Ct值35.0并有典型扩增曲线，则判定为双阳性；仅FAM或HEX通道阳性时分别判为携带汉滩病毒或汉城病毒；若两通道均无Ct值及扩增曲线，则为阴性。附录部分包含靶标序列、缓冲液配制方法及反应体系等技术细节，增强了标准的实用性与可操作性。整体内容构建了一套完整、科学、高效的病毒核酸检测流程，为肾综合征出血热的病原学监测与风险评估提供技术支持。汉滩病毒和汉城病毒双重实时荧光RT-PCR检测方法DB36T2206-2025适用于疾病预防控制机构、卫生检验检疫单位、动物疫控中心以及从事病原微生物检测的实验室人员，特别适用于开展啮齿类动物中汉滩病毒和汉城病毒分子检测的相关技术人员。该标准也可广泛应用于公共卫生应急响应、流行病学调查、野生动物疫源监测、实验室科研教学等领域，尤其适合需要快速、准确区分两种布尼亚病毒感染情况的场景。鉴于其明确的技术路径和严格的质量控制要求，本方法对于提升基层实验室病毒检测能力、统一区域检测标准、支撑地方疫情防控决策具有重要实践价值。同时，相关医学院校、研究机构在开展相关病毒学研究或建立检测平台时，也可参考本标准实施规范化操作。
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