动物源副猪嗜血杆菌分离与鉴定技术规程NYT4658-2025.pdf

1、动物源副猪嗜血杆菌分离与鉴定技术规程NYT4658-2025讲解了副猪嗜血杆菌（Haemophilus parasuis）从动物源样品中规范开展分离、纯化、筛查与精准鉴定的全过程技术路径，明确了该菌在猪鼻腔拭子、肺脏、心包液、胸腔积液、腹腔积液、关节液及脑脊液等临床样品中的操作要求；描述了样品采集与保存运输需遵循NY/T动物源细菌耐药性监测样品采集技术规程，规定了使用含NAD和胎牛血清的TSA培养基进行分离纯化，并在37、5% CO条件下培养1824小时的标准化条件；详述了形态学检查、卫星生长现象试验等初筛方法，以及生化鉴定、常规PCR、荧光定量PCR和微生物质谱（MALDI-TOF MS）四

2、种并行可选的确证鉴定方式，其中PCR法明确了引物序列、反应体系（25 L）、扩增参数（35个循环）及约520 bp特异性条带判读标准，荧光定量PCR则设定了Ct值35且具典型扩增曲线的质量控制阈值；列明了所需试剂材料包括NAD溶液、TAE缓冲液、琼脂糖凝胶、PCR预混液、SYBR Real Time PCR Master Mix及灭菌甘油等，仪器设备涵盖二级生物安全柜、高速冷冻离心机、PCR仪、荧光定量PCR仪、电泳系统及质谱仪等；强调所有操作须符合GB 19489实验室生物安全通用要求和NY/T兽医实验室生物安全要求通则，菌种保藏采用蔗糖脱脂乳保护剂或冻存于80，全程体现生物安全优先、方法可

3、重复、结果可溯源的技术原则。动物源副猪嗜血杆菌分离与鉴定技术规程NYT4658-2025适用于各级兽医实验室、动物疫病预防控制机构、出入境检验检疫技术中心、高校及科研院所中从事动物源细菌病原监测、耐药性跟踪、疫情诊断与溯源工作的专业技术人员；适用于生猪养殖企业兽医服务团队、第三方检测机构开展副猪嗜血杆菌感染现场快速响应与实验室确认；亦适用于兽药研发单位、疫苗生产企业在菌株筛选、种质资源建库及质量控制环节中对标准操作流程的执行与验证。本规程聚焦动物源细菌病原的实验室检测实践，不适用于人源临床样本或非猪源动物的常规筛查，其技术参数和判定标准专为我国猪群常见致病性副猪嗜血杆菌株系设计，兼顾基层实验室基础条件与高等级生物安全实验室的拓展应用需求。