鼻疽伯氏菌重组聚合酶恒温扩增（RAA）检测方法TCVMA 368-2026.docx

1、鼻疽伯氏菌重组聚合酶恒温扩增（RAA）检测方法TCVMA 368-2026讲解了针对高致病性人兽共患病原体鼻疽伯氏菌（Burkholderia mallei）所建立的标准化核酸检测技术路径，系统规定了该病原体在马属动物临床样本中的快速、灵敏、特异性识别方法。文件明确了适用样本类型为疑似感染动物的鼻分泌液、咳出液、溃疡脓液及血液，并从技术原理、试剂材料、仪器设备、操作流程到生物安全要求等维度构建完整检测体系。其中核心方法采用重组聚合酶恒温扩增（RAA）技术，依托HP假定蛋白基因靶标设计特异性引物与FAM标记探针，在恒温条件下实现DNA靶序列高效扩增与荧光实时监测；配套规范了CTAB法核酸提取、阳

2、性/阴性对照制备、无核酸酶操作环境、荧光信号判读阈值等关键控制点。文件严格引用GB 19489实验室生物安全通用要求和NY/T 541兽医诊断样品采集规范，强调所有实验操作须在BSL-3级或以上生物安全条件及生物安全柜内完成，人员需采取二级及以上个人防护。标准还对试剂纯度、水质等级、仪器精度、温度控制及废弃物灭菌处置提出量化要求，确保检测结果可重复、可比对、可溯源，为鼻疽疫情早期发现、现场快筛和实验室确证提供权威技术支撑。鼻疽伯氏菌重组聚合酶恒温扩增（RAA）检测方法TCVMA 368-2026适用于各级动物疫病预防控制机构、出入境检验检疫实验室、兽医诊断中心、高校及科研院所生物安全实验室中从事马鼻疽防控、人兽共患病监测、动物病原微生物核酸检测的专业技术人员；同时适用于马属动物养殖场、动物诊疗机构、野生动物救护中心等一线防疫单位中具备分子生物学检测能力的兽医工作者。该标准亦可供海关、边检、农业农村行政主管部门在跨境动物疫病风险评估、应急响应与疫情溯源调查中作为技术判定依据，尤其适合基层缺乏复杂PCR热循环设备但具备基础荧光检测能力的实验室开展现场初筛。标准实施主体需已通过生物安全二级（BSL-2）及以上实验室资质认定，并配备经过鼻疽病原操作专项培训的技术人员，不适用于非专业机构或未配置相应生物安全设施与分子检测平台的普通兽医门诊。