1、2023?04?11发布2023?08?01实施浆果类水果中花青苷的测定高效液相色谱法31中华人民共和国农业行业标准备案号：XXXX-XXXX67.080.10CCS B43522023Determination of athocyanins in berry fruits by high performance liquidchromatography中华人民共和国农业农村部发 布N Y/T 前言本文件按照G B/T 标准化工作导则第部分:标准化文件的结构和起草规则 的规定起草.请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别专利的责任.本文件由农业农村部农产品质量安全监管司提
2、出.本文件由农业农村部农产品营养标准专家委员会归口.本文件起草单位:青岛农业大学、农业农村部果品质量安全风险评估实验室(青岛)、青岛市农产品质量安全中心、江苏徐淮地区徐州农业科学研究所、山东农业工程学院、青岛市现代农业质量与安全工程重点实验室.本文件主要起草人:聂继云、万浩亮、韩令喜、张佳、姜鹏、贾东杰、孟杰、原永兵、秦旭、刘晓丽、付红蕾、魏亦山.N Y/T 浆果类水果中花青苷的测定高效液相色谱法范围本文件规定了浆果类水果中花青苷测定的高效液相色谱法.本文件适用于浆果类水果中 种花青苷(附录A)的测定.本文件测定的 种花青苷 中,矮牵牛素 O 葡萄 糖苷 和 芍 药 素 O 葡 萄 糖 苷 的
3、 线 性 范 围 为 m g/L m g/L,其余 种花青苷的线性范围为 m g/L m g/L;以试样称样量为g、定容体积为 m L计,种花青苷的检出限和定量限详见附录A.规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件.G B/T 分析实验室用水规格和试验方法术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义.原理浆果类水果中的花青苷经盐酸甲醇溶液振荡提取,经反相色谱柱分离,紫外可见光检测器或二极管阵列检测器检测,以保留时间定性,外标法定量.试剂和材料
4、除非另有规定,本方法所用试剂均为分析纯,水为G B/T 规定的一级水.甲醇(CHOH).甲酸(HC OOH):色谱纯.盐酸(HC l):.乙腈(CHC N):色谱纯.盐酸甲醇溶液:m L盐酸()和 m L甲醇()混匀.提取剂:m L盐酸甲醇溶液()和 m L甲醇()混匀.流动相A:m L甲酸(),用超纯水定容至 m L.流动相B:m L乙腈().标准品:纯度,或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质,相关信息见附录A.单标储备溶液:准确称取 m g,用提取剂()溶解并定容至m L,即为 m g/L的单标储备液,于 储存于密闭棕色玻璃瓶中,有效期个月.混合标准工作液:将单标储备溶液混合后,用提取
5、剂()作为溶剂,逐级稀释成 m g/L、m g/L、m g/L、m g/L、m g/L、m g/L的花青苷混合标准溶液,现用现配.根据浆果类水果种类,选择相应的单标储备溶液进行配制.微孔滤膜:m,有机相.仪器与设备 高效液相色谱仪:配有紫外可见光检测器或二极管阵列检测器.N Y/T 分析天平:感量为 g和 g.摇床:温度可控,转速 r/m i n.离心机:转速不低于 r/m i n.冷冻研磨机:转速 r/m i n.试样的制备与保存 试样制备果实洗净,擦干,取可食部分 g,切碎混匀,用冷冻研磨机研成粉末.试样保存试样装入样品瓶中,密封,置 条件下冷冻保存.测定步骤 提取称取 g试样于 m L离
6、心管中,加入 m L提取剂(),混匀,置摇床上 r/m i n振荡提取 m i n,r/m i n离心 m i n,将上清液转入 m L棕色容量瓶中,残渣再用 m L提取剂()按上述步骤重复提取一次,合并上清液,用提取剂()定容至 m L,混匀,过微孔滤膜(),待测.液相色谱参考条件a)色谱柱:C 柱,mm mm(内径),粒径m,或相当者;b)进样量:L;c)流速:m L/m i n;d)柱温:;e)检测波长:n m;f)梯度洗脱条件,见表.表流动相梯度洗脱程序时间,m i n流动相A,流动相B,标准曲线的绘制将混合标准工作液()注入高效液相色谱仪中进行测定.以峰面积为纵坐标、标准溶液浓度为横坐标,绘制标准曲线,求回归方程和相关系数.测定将试样溶液()注入高效液相色谱仪中进行测定.以保留时间定性,按外标法以色谱峰面积定量.若样品溶液花青苷浓度超出了标准曲线的线性范围,应稀释后再行测定.空白试验除不加试样外,均按照 测定步骤操作.结果计算试样中各花青苷的含量按公式()计算.N Y/T ()Vfm()式中:质量分数的数值,单位为毫克每千克(m g/k g);从标准曲线上查得的试样提取液中待
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