1、 ICS 65.020.20 CCS B 31 12 天津市地方标准 DB12/T 12922023 花椰菜主要流行病害抗性鉴定技术规程 Technical standards for identification of resistance to important epidemic diseases in cauliflower 2023-12-28 发布 2024-02-01 实施 天津市市场监督管理委员会 发 布 DB12/T 12922023 I 前言 本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。本文件由天津市农业农村委员会提出并
2、归口。本文件起草单位：天津科润农业科技股份有限公司、天津市农业科学院。本文件主要起草人：孙德岭、姚星伟、张小丽、牛国保、单晓政、文正华、刘莉莉、江汉民。DB12/T 12922023 1 花椰菜主要流行病害抗性鉴定技术规程 1 范围 本文件规定了花椰菜主要流行病害抗性鉴定的试剂、仪器设备、病原菌接种体制备、病原菌接种方法、病情调查、群体抗病性评价、鉴定记载等的要求。本文件适用于花椰菜主要流行病害抗性鉴定。2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适
3、用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。4 试剂 BL 培养基 4.1 葡萄糖10.0 g，肉膏3.0 g，肝浸出液150.0 ml，植胨3.0 g，L-半胱氨酸 HCL 0.5 g，朊蛋白胨10.0 g，可溶性淀粉0.5 g，吐温80 1.0 g，胰酪胨5.0 g，酵母膏5.0 g，溶液A（25 g KH2PO4、35 g K2HPO4溶于蒸馏水并定溶至250 ml）10.0 ml，溶液B（0.5 g FeSO4 7H2O、10.0 g MgSO4 7H20、0.337 g MnSO4 2H2O和0.5 g Na Cl溶于
4、蒸馏水并定容至250 ml）5.0 ml，琼脂15.08 g，加蒸馏水至1000 ml。pH值调至7.2，高温灭菌后备用。玉米粒培养基 4.2 量取500 ml水，加入玉米粉30 g，保持温度在60 左右约1 h，用纱布过滤后，加入适量的水补足500 ml。另取500 ml水，加入琼脂17 g，加热使之慢慢融化，过滤后补足水至500 ml。两液混合后分装，高温灭菌后备用。玉米粒煮熟煮熟，高温灭菌 70%乙醇溶液 4.3 量取700 ml 95%乙醇，加水定容至950 ml，混合均匀。1%次氯酸钠溶液 4.4 量取10 ml有效氯含量10%的次氯酸钠原液加入到体积90 ml的纯净水中，混合均匀。
5、5 仪器设备 DB12/T 12922023 2 恒温摇床 5.1 回旋频率范围：40 r/min300 r/min；温度控制范围：560。恒温培养箱 5.2 温度范围：00；温度波动范围：0.5。低温冰柜 5.3 箱内温度：-15-25。灭菌锅 5.4 温度范围：0135；灭菌时间：4min120min；最高工作压力：0.22MPa。超净工作台 5.5 洁净等级：100级0.5 ；平均风速：0.25m/s0.6m/s。电子天平 5.6 感量0.01g。血球计数板 5.7 规格16 25或者25 16。离心机 5.8 5000 r/min。显微镜 5.9 物镜倍数：10、20、50、100；目
6、镜倍数10。观察功能：明场、暗场。6 病原菌接种体制备 黑腐病菌接种体制备 6.1 从花椰菜黑腐病样采用常规组织分离法分离病原菌，并对分离物进行鉴定，采用单孢分离法进行分离纯化，经柯赫（Koch）法则回接验证后，保存备用。接种前将供试菌株转接于BL液体培养基上，置于28 摇床恒温培养1天后取出，加入适量无菌水稀释，用血球计数板调整菌液浓度至1 108 CFU/ml，置于4 冰箱保存备用。霜霉病菌接种体制备 6.2 采集花椰菜霜霉病病叶表面着生的霉层及其附着物用无菌水冲净，再用无菌水冲洗3遍，将洗净的病叶放入无菌培养皿中置于温度20、相对湿度95%的培养箱中黑暗培养1d。之后用湿棉球将新产生的孢子囊轻轻剥落于无菌水中制成悬浮液，通过显微镜观察其孢子形态进行病原菌鉴定，利用血球计数板调整菌液浓度至1 106 CFU/ml，置于4 冰箱保存备用。菌核病菌接种体制备 6.3 DB12/T 12922023 3 从花椰菜菌核病样采用常规组织分离法分离病原菌，采用单孢分离法进行分离纯化，经柯赫（Koch）法则回接验证后，保存备用。接种前将菌株置于22 培养箱中培养3天4天至长出白色菌丝进行活化，用
安全达人 