动物冠状病毒通用RT-PCR检测方法NYT4436-2023.pdf

1、动物冠状病毒通用RT-PCR检测方法NYT4436-2023讲解了适用于多种动物源性冠状病毒核酸筛查的标准化分子生物学检测技术体系，系统规定了检测范围、规范性引用文件、试剂与材料、引物序列、仪器设备、样品采集与处理、RNA提取、RT-PCR扩增反应体系与程序、电泳分析及结果判定等全流程技术要求。该方法基于冠状病毒RNA依赖性RNA聚合酶（RdRp）基因高度保守区域设计简并引物CoVF和CoVR，可同步扩增包括猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）、猪流行性腹泻病毒（PEDV）、牛冠状病毒（BCoV）、马冠状病毒（ECoV）、猫传染性腹膜炎病毒（FCoV）、犬冠状病毒（CCoV）和鸡传染性支气管炎病毒（

2、IBV）等在内的多种动物冠状病毒，扩增片段长度为约440 bp。标准明确区分阳性对照（如IBV或PEDV培养物）与阴性对照（SPF鸡胚尿囊液或Vero细胞培养物），强调实验室生物安全要求、防污染控制措施以及样品保存运输条件（如4暂存不超过24 h、20短期保存、70长期保存且冻融不超过3次）。文件还细化了咽喉拭子、泄殖腔/肛拭子、组织样品及环境拭子四类样本的规范采集操作、匀浆离心处理步骤及核酸提取路径，确保检测结果的特异性、敏感性与可重复性，为动物冠状病毒早期预警、疫情溯源和跨物种传播风险评估提供统一技术支撑。动物冠状病毒通用RT-PCR检测方法NYT4436-2023适用于各级动物疫病预防控制机构、海关出入境检验检疫实验室、农业科研院所、高校兽医教学与研究单位、规模化养殖场自检实验室、第三方检测服务机构及公共卫生相关监测部门。尤其适用于从事畜禽、伴侣动物、实验动物及野生动物疫病诊断、监测与流行病学调查的技术人员；兽医临床诊疗机构中需开展病毒性腹泻、呼吸道综合征等冠状病毒相关症候群鉴别诊断的执业兽医；以及参与重大动物疫情应急响应、跨境动物疫病联防联控、人畜共患病风险评估与生物安全防控体系建设的专业人员。本标准亦可为畜牧兽医行政管理部门制定防控策略、开展监督抽检和实验室能力验证提供技术依据，对保障畜牧业生产安全、动物源性食品安全及防范动物冠状病毒向人类外溢具有直接指导价值。