1、ICS 11.020 CCS C 10 团体标准 T/CACM 1027.2032021 法半夏配方颗粒 PCR 鉴别 PCR identification of Fabanxia peifangkeli 2021-11-29 发布 2021-11-29 实施 中 华 中 医 药 学 会 发 布 T/CACM 1027.2032021 I 目 次 前言.II 1 范围.1 2 规范性引用文件.1 3 术语和定义.1 4 仪器设备.1 5 试剂试药.1 6 鉴别引物序列.1 7 检验程序.2 7.1 基本要求.2 7.2 取样.2 7.3 DNA 提取.2 7.4 PCR 扩增.2 7.5 扩增
2、产物检测.3 8 结果判定.3 9 结果报告.3 9.1 一般要求.3 9.2 检测报告.3 10 质量保证.3 11 废弃物处理.4 附录 A（规范性）检测用仪器设备和试剂试药.5 附录 B（资料性）法半夏配方颗粒 PCR 反应体系的建立.7 参考文献.10 T/CACM 1027.2032021 II 前 言 本文件按照GB/T 1.12020 标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件中的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由中国中医科学院中药资源中心提出。本文件由中华中医药学会归口。本文件起草单位：中国中医科学院中药资源中
3、心、华润三九医药股份有限公司、安徽省食品药品检验研究院、浙江省中医院、成都中医药大学附属医院、安徽华润金蟾药业股份有限公司、华润三九（雅安）药业有限公司。本文件主要起草人：袁媛、张辉、蒋超、张亚中、蒲婧哲、胡冲、郑敏霞、郑琰、高波、吴建国。T/CACM 1027.2032021 1 法半夏配方颗粒 PCR 鉴别 1 范围 本文件规定了使用聚合酶链式反应（PCR）鉴别法半夏配方颗粒的通用方法和要求。本文件适用于法半夏配方颗粒的鉴别。本文件不适用于正伪混合样品的鉴定。2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于
4、本文件；不注明日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 27403 实验室质量控制规范食品分子生物学检测 T/CACM 1027.22016 中药分子鉴定通则 第 2 部分：中药提取物与中成药 中华人民共和国药典（四部）3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。3.1 法半夏配方颗粒 fabanxia peifangkeli 为天南星科植物半夏Pinellia ternate(Thunb)Breit.的干燥块茎经炮制并按标准汤剂的主要质量指标加工制成的配方颗粒。4 仪器设备 仪器设备应符合附录 A 的要求。5 试剂
5、试药 试剂试药应符合附录 A 的要求。6 鉴别引物序列 BX-123aF：5-CGGCGGAGGCACGCAAT-3 T/CACM 1027.2032021 2 BX-123R：5-AATTCACACCACGTATCGCATTT-3 7 检验程序 7.1 基本要求 为防止交叉污染，收样、取样、粉碎、DNA提取和核酸扩增与产物检测应在不同操作间或在同一操作间不同隔离区域进行，进入各区域应严格按照单一方向进行，即样品制备区核酸制备区扩增区检测区。7.2 取样 送检样品总量应不低于 10 g，每批分为 3 等份，1/3 供实验室分析用，另 1/3 供复核用，其余 1/3留样保存。收样时应检查包装的完
6、整性，并在样品袋上贴上标签，填写采集数据表。对商品包装和送样说明进行拍照记录，照片随样品一起备档。送检样品抽样方法依照中华人民共和国药典（四部）通则 0211 进行取样。7.3 DNA 提取 送检样品 DNA 提取步骤如下：a)取样品 1 g，粉碎成粉末；b)取上述粉末 0.02 g，置 2 mL 离心管中，加入细胞核裂解液 300L、乙二胺四乙酸二钠溶液50L、蛋白酶 K 溶液 20L、RNA 酶 A 溶液 5L，充分涡旋震荡混匀 3 min，56 下水浴 60 min；c)离心（12000 g）5 min 后，吸取上清液 250L 至一新的 2 mL 离心管中，加入裂解缓冲液250L，混匀，转移至纯化柱，将纯化柱放入离心机，离心（12000 g）5 min，弃去滤过液；d)往纯化柱中加入洗脱液 700L，离心（12000 g）1 min；e)重复步骤 d）2 次；f)弃去滤过液，再离心（12000 g）2 min，取出纯化柱，室温放置 2 min，晾干吸附材料中的剩余洗脱液；g)将纯化柱换入一个新的2 mL 离心管，向吸附膜的中央悬空滴加无菌双蒸水100 L，静置3 min，离心（
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