牛体细胞体外培养与冷冻保存操作规程TNXSLX 0207-2025.pdf

1、牛体细胞体外培养与冷冻保存操作规程TNXSLX 0207-2025讲解了牛体细胞，特别是耳缘组织成纤维细胞在体外进行分离、培养、传代、冷冻保存及复苏的标准化技术流程。该规程明确了从组织采集到细胞冻存全过程的操作规范，涵盖了术语定义、技术要求、质量检测、档案管理和安全注意事项等内容。规程详细描述了组织样本的采集方法，包括牛只信息记录、耳缘组织的无菌采集与处理方式，并规定了样本在4条件下运输至实验室的时间限制。在原代细胞培养方面，提供了组织块贴壁法和胶原酶消化法两种分离技术路径，明确了培养基成分、培养环境及换液周期。对于传代培养，设定了细胞融合度为80%-90%时进行消化传代的具体步骤，包括胰蛋白

2、酶的使用浓度、作用时间以及离心重悬和接种比例。在细胞冷冻保存环节，强调选择低代次对数生长期细胞，采用特定配比的冻存液（DMEM:FBS:DMSO=7:2:1），并推荐程序降温或分层降温方式以保证细胞存活率。细胞复苏过程要求快速融化后离心去除DMSO，并通过更换培养基清除死亡细胞。规程还规定了必须开展的质量检测项目，如无菌检测、细胞形态学鉴定、种属特异性PCR验证以及台盼蓝染色法测定活率，确保复苏后细胞活率高于85%。此外，文件强调建立完整的电子与纸质双轨档案系统，实现全过程可追溯，并引用多项国家及行业标准作为支撑依据，强化操作的安全性与合规性。牛体细胞体外培养与冷冻保存操作规程TNXSLX 0207-2025适用于从事牛遗传资源保护、动物生物技术研究、畜禽细胞工程、种质资源库建设等相关领域的科研机构、高校实验室、畜牧养殖企业及生物技术服务公司。尤其适用于开展牛体细胞保种、克隆繁殖、基因编辑、干细胞研究以及畜禽遗传资源长期保存工作的技术人员与管理人员。该规程也可作为相关实验室标准化建设、生物样本管理、细胞质量控制和实验操作培训的技术指导文件，同时为动物细胞资源的规范化采集、保存与共享提供依据，广泛服务于现代畜牧业可持续发展与生物多样性保护领域。