BJH 202203 化妆品中16α-羟基泼尼松龙的测定.rar

化 妆 品 补 充 检 验 方 法 BJH 202203化妆品中 16-羟基泼尼松龙的测定BJH2022-11-18 发布国 家 药 品 监 督 管 理 局 发 布化妆品中 16-羟基泼尼松龙的测定（BJH 202203）1 范围本方法规定了化妆品中 16-羟基泼尼松龙的定性和定量测定方法。本方法适用于膏霜乳类、液体（水）类化妆品中 16-羟基泼尼松龙的定性和定量测定。2 原理样品经 50%乙腈超声提取，采用高效液相色谱仪分离，质谱检测器检测。根据保留时间和特征离子对的相对丰度比定性，定量离子对峰面积定量，以标准曲线法计算含量。3 试剂和材料除另有规定外，本方法中所用试剂均为分析纯及以上规格，水为符合 GB/T 6682 规定的一级水。3.1 乙腈，色谱纯。3.2 50%乙腈：取乙腈（3.1）、水按体积比 1:1 混合，摇匀。3.3 标准品：16-羟基泼尼松龙（16alpha-hydroxyprednisolone）标准品，纯度98%。标准品的中文名称、英文名称、CAS 号、分子式、相对分子质量、结构式详见附录 A 中的表A.1。3.4 16-羟基泼尼松龙标准储备溶液：称取 16-羟基泼尼松龙标准品 10mg（精确到0.00001g），置于 10mL 容量瓶中，用乙腈（3.1）溶解并定容至刻度，摇匀。该标准储备溶液的质量浓度为 1000mg/L。置于-18冰箱中保存。3.5 16-羟基泼尼松龙标准溶液：精密移取 16-羟基泼尼松龙标准储备溶液（3.4）1.0mL，置于 100mL 容量瓶中，用乙腈（3.1）定容至刻度，摇匀。该标准溶液的质量浓度为10mg/L。4 仪器和设备4.1 高效液相色谱-三重四极杆质谱联用仪。4.2 分析天平：感量 0.0001g 和 0.00001g。4.3 超声波清洗器。4.4 涡旋混合仪。4.5 高速离心机。5 试样制备与保存样品应按照标签标示的贮存条件进行保存。取样前，应检查封口的完整性，观察样品的性状和特征，并使样品混匀。打开包装后，应尽可能快地取出所要测定部分进行分析，取样后，应将样品进行密封保存。6 分析步骤6.1 空白基质提取液称取空白试样 0.2g（精确到 0.0001g），置于 10mL 具塞比色管中，自“加入 50%乙腈约9mL”起与样品同法处理（6.4），作为空白基质提取液。空白样品的性状应与待测化妆品尽量基本一致。6.2 基质标准中间液精密量取 16-羟基泼尼松龙标准溶液（3.5）0.1mL，置于 10mL 容量瓶中，用空白基质提取液（6.1）稀释至刻度，摇匀，制成 16-羟基泼尼松龙浓度为 100g/L 的基质标准中间液。基质标准中间液现用现配。6.3 基质标准系列溶液精密量取基质标准中间液（6.2）适量，用空白基质提取液（6.1）配制浓度为 0.5、1、2、5、10g/L 基质标准系列溶液。基质标准系列溶液现用现配。6.4 样品处理称取样品 0.2g（精确到 0.0001g），置于 10mL 具塞比色管中，加入 50%乙腈（3.2）约9mL，涡旋振荡，使试样与提取溶剂充分混匀。超声提取 10min，静置至室温，用 50%乙腈定容至刻度，摇匀，以 10000r/min 转速离心 10min，取上清液经 0.22m 有机滤膜过滤，滤液作为供试品溶液备用（供试品溶液可根据实际浓度进行适当稀释）。6.5 仪器参考条件6.5.1 色谱条件色谱柱：C18柱（100 mm2.1 mm，2.7m），或等效色谱柱；流动相：A 为水，B 为乙腈（3.1）。梯度洗脱程序见表 1；流速：0.3mL/min；柱温：30；进样量：5L。表 1 梯度洗脱程序时间（min）流动相 A（%）流动相 B（%）0.009551.0095510.0059513.0059513.1095515.009556.5.2 质谱条件离子源：电喷雾离子源（ESI 源）；监测模式：负离子多反应监测模式（MRM），监测离子对及相关参数设定见表 2。表 2 16-羟基泼尼松龙监测离子对及相关参数设定组分名称母离子（m/z）子离子（m/z）CE（eV）16-羟基泼尼松龙375.4*327.0-23组分名称母离子（m/z）子离子（m/z）CE（eV）283.2-36*为推荐的定量离子。注：当采用不同质谱仪器时，仪器参数可能存在差异，测定前应将质谱参数优化到最佳。6.6 定性判定取供试品溶液（6.4）与标准溶液在相同分析条件下测定，样品中如呈现定量离子对和定性离子对的色谱峰，被测成分的特征离子峰保留时间与标准溶液对应的保留时间一致，且选择的监测离子对的相对丰度比与相当浓度的标准溶液的监测离子对的相对丰度比的最大偏差不超过表 3 的规定，则可以判定样品中存在对应的组分。表 3 定性确证时相对离子丰度比的最大允许偏差相对离子丰度（k）k50