1、中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准犌犅 食品安全国家标准婴幼儿食品和乳品中胆碱的测定 发布 实施中华人民共和国国家卫生健康委员会国 家 市 场 监 督 管 理 总 局发 布犌犅 前言本标准代替 食品安全国家标准婴幼儿食品和乳品中胆碱的测定。本标准与 相比，主要变化如下：删除了第二法雷氏盐分光光度法，增加了离子色谱法作为第二法；增加了液相色谱串联质谱法作为第三法。犌犅 食品安全国家标准婴幼儿食品和乳品中胆碱的测定范围本标准规定了婴幼儿食品和乳品中胆碱的测定方法。本标准适用于婴幼儿食品和乳品中胆碱的测定。第一法酶比色法原理试样经酸水解，再经酶作用后与显色剂反应生成有色物质，在一定浓度范围内
2、，其颜色的深浅与胆碱含量成正比，外标法定量。试剂和材料除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为 规定的三级水。试剂 三羟甲基氨基甲烷（）。苯酚（）。浓盐酸（）。氢氧化钠（）。胆碱氧化酶：，置于 保存。过氧化物酶：，置于保存。氨基安替比林（）。磷脂酶：，置于 保存。试剂配制 盐酸溶液（）：量取 浓盐酸注入约 水中，稀释至 。盐酸溶液（）：量取 浓盐酸注入约 水中，稀释至 。三羟甲基氨基甲烷缓冲溶液（）（）：准确称取 三羟甲基氨基甲烷溶于 水中，用盐酸溶液（）调至 ，再用水定容至 。此溶液在冰箱中可保存个月。显色剂：取 的胆碱氧化酶、的过氧化物酶、的磷脂酶、氨基安替比林和 苯酚置于 的容量瓶中
3、，用 缓冲溶液溶解并定容。临用现配。氢氧化钠溶液（）：称取 氢氧化钠，溶于水并稀释至 ，采用塑料容器储存。犌犅 标准品胆碱酒石酸氢盐标准品（，相对分子质量：，号：）：纯度，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。标准溶液配制 胆碱（以胆碱氢氧化物计，相对分子质量 ）标准储备溶液（）：准确称取在 烘至恒重的胆碱酒石酸氢盐 ，用水溶解并转移至 容量瓶中定容，混匀。以下避光保存，有效期个月。胆碱标准工作溶液（）：吸取 胆碱标准储备溶液于 容量瓶中，用水定容，混匀，以下避光保存，有效期个月。材料 水性滤膜针头滤器。注射器：或相当者。仪器和设备 分析天平：感量分别为 和 。恒温水浴装置：温度可控制在
4、和。计：精度 。分光光度计。分析步骤 样品前处理 样品预处理准确称取（精确至 ）混合均匀的液态试样于 锥形瓶中，加入 的盐酸溶液，加塞混匀。准确称取（精确至 ）混合均匀的半固态或固态试样于 锥形瓶中，加入 的盐酸溶液，加塞混匀。水解将装有试样的容器放在 水浴中，放置（每隔 振摇一次），冷却至室温。用氢氧化钠溶液（）调至 ，转入 容量瓶中，用水定容至刻度。过滤用滤纸过滤水解液，若滤液不澄清，用 水性滤膜针头滤器再次过滤。收集滤液待测。测定 标准曲线的制作分别吸取 、胆碱标准工作溶液（）于 犌犅 的容量瓶中，用水定容至刻度，混匀，配制成浓度分别为 、的标准系列工作溶液。准备支比色管，一个比色管用作
5、试剂空白（），加入 水，另支比色管对应加入标准系列工作溶液各 ，再分别加入 显色剂，混匀，把比色管置于 水浴中保温反应 。试样准备准备支比色管（，），均加入待分析溶液 ，比色管加入 水，比色管加入 显色剂，混匀，把比色管置于 水浴中保温反应 。比色测定将标准系列工作溶液及试样从水浴中取出，冷却至室温。在波长 处，用水作空白，用微量比色皿测定吸光值。以胆碱标准溶液的浓度为横坐标，以标准溶液的吸光值减去试剂空白（比色管）的吸光值为纵坐标，制作标准曲线。分析结果的表述 净吸光值的计算通常配制的试剂会产生轻微颜色，且由于水解作用滤液也不是无色的，为了除去这些干扰因素，必须从总吸光值中减去各自的空白值（
6、比色管和比色管）。试样净吸光值按式（）计算：犃犃犃犃（）式中：犃 试样净吸光值；犃 总吸光值（比色管）；犃 试剂吸光值（比色管）；犃 滤液吸光值（比色管）。犃和犃不应大于总吸光值的。胆碱含量的计算试样中的胆碱（以胆碱氢氧化物计）的含量按式（）计算：犡犮犞犳 犿 （）式中：犡 试样中的胆碱（以胆碱氢氧化物计）含量，单位为毫克每百克（）；犮 自标准曲线上查得净吸光值对应的胆碱的浓度，单位为毫克每升（）；犞 水解液被稀释的体积（水解液定容体积，通常为），单位为毫升（）；犳 稀释倍数；换算系数；犿 试样的质量，单位为克（）；换算系数。计算结果保留三位有效数字。犌犅 精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的。其他当固态或半固态试样称样量为时，方法的检出限为 ，定量限为 ；当液态试样称样量为 时，方法的检出限为 ，定量限为 。第二法离子色谱法原理试样经酸水解，固相萃取柱净化后离子色谱分离，电导检测器检测，外标法定量。试剂和材料除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为 规定的一级水。试剂 浓盐酸（）。甲烷磺酸（）：色谱纯。试剂配制 盐酸溶液（）：量取 浓盐酸注入约
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