1、中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准G B4 7 8 9.4 92 0 2 4食品安全国家标准食品微生物学检验产志贺毒素大肠埃希氏菌检验2 0 2 4-0 2-0 8发布2 0 2 4-0 8-0 8实施中华人民共和国国家卫生健康委员会国 家 市 场 监 督 管 理 总 局发 布食品安全国家标准食品微生物学检验产志贺毒素大肠埃希氏菌检验1 范围本标准规定了食品中产志贺毒素大肠埃希氏菌(S h i g at o x i n-p r o d u c i n gE s c h e r i c h i ac o l i,S T E C)的检验方法。本标准适用于食品中产志贺毒素大肠埃希氏菌的检验。
2、2 设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外,其他设备和材料如下。2.1 恒温培养箱:3 61、4 41。2.2 冰箱:25、-1 8-2 0。2.3 天平:感量为0.0 0 1g。2.4 均质器。2.5 旋涡振荡器。2.6 恒温水浴箱5 05 5、恒温金属浴9 91。2.7 离心机:最大转速至少1 60 0 0g。2.8 实时荧光定量P C R仪。2.9 混匀仪。2.1 0 无菌吸管:1m L(具0.0 1m L刻度)、1 0m L(具0.1m L刻度)。2.1 1 电动移液枪或吸耳球。2.1 2 无菌具塞锥形瓶:容量2 5 0m L、5 0 0m L、10 0 0m L。2.1 3 无
3、菌培养皿:直径9 0mm。2.1 4 无菌均质袋:带滤网,无菌均质杯。2.1 5 平盖八联排管或9 6孔P C R微孔板。2.1 6 磁珠分离富集装置。2.1 7 微量移液器及吸头:0.2L2L、2L2 0L、2 0L2 0 0L、1 0 0L10 0 0L。2.1 8 1 0L无菌接种环。2.1 9 1.5m L无菌E P管,无菌微量离心管,无菌1 5m L离心管。2.2 0 0.2 2m孔径无菌过滤膜。2.2 1 全自动微生物生化鉴定系统。2.2 2 基质辅助激光解析电离飞行时间质谱仪(MA L D I-TO FM S)。3 培养基和试剂3.1 改良胰蛋白胨大豆液体培养基(mT S B):
4、见A.1。3.2 E C肉汤培养基(E C):见A.2。3.3 胰蛋白胨大豆琼脂培养基(T S A):见A.3。3.4 S T E C显色培养基:见A.4。1G B4 7 8 9.4 92 0 2 43.5 麦康凯琼脂培养基(MA C):见A.5。3.6 脑心浸出液肉汤(B H I)-5 0%甘油:见A.6。3.7 0.8 5%灭菌生理盐水。3.8 5%C h e l e x-1 0 0溶液:见A.7。3.9 E-b u f f e r溶液:见A.8。3.1 0 1m o l/L盐酸溶液。3.1 1 1T E缓冲液:见A.9。3.1 2 无菌P B S缓冲液:见A.1 0。3.1 3 实时荧光
5、定量P C R反应体系配制用试剂(1 0b u f f e r、d NT P s、T a q酶和d d H2O)。3.1 4 S T E C免疫磁珠分离相关试剂或等效试剂盒。3.1 5 生化鉴定试剂盒或生化鉴定相关试剂。3.1 6 具有菌种保藏资质单位提供的志贺毒素基因(S h i g at o x i ng e n e,s t x)阳性大肠埃希氏菌标准菌株,即携带s t x 1和/或s t x 2,如O 1 5 7:H 7CMC C(B)4 4 9 3 9,G DMC C 1.2 7 0 2或等效菌株 和s t x阴性大肠埃希氏菌标准菌株,即不携带s t x 1和s t x 2,如CMC C
6、(B)4 4 1 0 2,G DMC C 1.2 2 3或等效菌株。免疫磁珠富集处理的标准菌株:血清型O 2 6型大肠埃希氏菌标准菌株,如CMC C(B)4 3 2 2 1、G DMC C 1.3 8 0 7或等效菌株;血清型O 4 5,CMC C(B)4 3 2 4 2,G DMC C 1.3 8 0 8或等效菌株;血清型O 1 0 3,C M C C(B)4 3 2 3 4,G DM C C 1.3 8 0 9或等效菌株;血清型O 1 1 1,C M C C(B)4 3 2 1 1,G DM C C 1.3 8 1 0或等效菌株;血清型O 1 2 1,C M C C(B)4 3 2 2 8,G DM C C 1.3 8 1 1或等效菌株;血清型O 1 4 5,C M C C(B)4 3 2 4 3,G DM C C 1.3 8 1 2或等效菌株。4 检验程序产志贺毒素大肠埃希氏菌检验程序见图1。图1 产志贺毒素大肠埃希氏菌检验程序2G B4 7 8 9.4 92 0 2 45 操作步骤5.1 样品制备5.1.1 样品保存样品采集后应尽快送往实验室进行检测,如不能及时检测,应将待检样
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